流式細(xì)胞儀(flow cytometry，F(xiàn)CM)是測(cè)量染色細(xì)胞標(biāo)記物熒光強(qiáng)度的細(xì)胞分析儀，是在單個(gè)細(xì)胞分析和分選基礎(chǔ)上發(fā)展起來(lái)的對(duì)細(xì)胞的物理或化學(xué)性質(zhì)(如大小、內(nèi)部結(jié)構(gòu)、DNA、RNA、蛋白質(zhì)、抗原等)進(jìn)行快速測(cè)量并可分類(lèi)收集的高技術(shù)。
工作原理簡(jiǎn)介：采用激光作為激發(fā)光源，其具有更好的單色性與激發(fā)效率；利用熒光染料與單克隆抗體技術(shù)結(jié)合的標(biāo)記技術(shù)，檢測(cè)的靈敏度和特異性；用計(jì)算機(jī)系統(tǒng)對(duì)流動(dòng)的單細(xì)胞懸液中單個(gè)細(xì)胞的多個(gè)參數(shù)信號(hào)進(jìn)行數(shù)據(jù)處理分析，了檢測(cè)速度與統(tǒng)計(jì)分析性。
流式細(xì)胞儀主要由以下五部分構(gòu)成：①流動(dòng)室及液流驅(qū)動(dòng)系統(tǒng)；②激光光源及光束形成系統(tǒng)；③光學(xué)系統(tǒng)；④信號(hào)檢測(cè)與存儲(chǔ)、顯示、分析系統(tǒng)；⑤細(xì)胞分選系統(tǒng)。
其中激光光源及光束形成系統(tǒng)：流式細(xì)胞儀可配備一根或多根激光管，常用的激光管是氬離子氣體激光管，它的發(fā)射光波長(zhǎng)488nm，此外可配備氦氖離子氣體激光管(波長(zhǎng)633nm)和/或紫外激光管。
流式細(xì)胞儀的主要測(cè)定信號(hào)熒光是由激發(fā)光激發(fā)的，熒光信號(hào)的強(qiáng)弱與激發(fā)光的強(qiáng)度和照射時(shí)間相關(guān)，激光是一種相干光源，它能提供單波長(zhǎng)、高強(qiáng)度、高穩(wěn)定性的光照，正是能達(dá)到這一要求的理想的激發(fā)光光源。
在激光光源和流動(dòng)室之間有兩個(gè)圓柱形透鏡，將激光光源發(fā)出的橫截面為圓形的激光光束聚焦成橫截面較小的橢圓形激光光束(22μm×66μm)，在這種橢圓形激光光斑內(nèi)激光能量成正態(tài)分布，使通過(guò)激光檢測(cè)區(qū)的細(xì)胞受照強(qiáng)度一致。
光學(xué)系統(tǒng)由若干組透鏡、小孔、濾光片組成，大致可分為流動(dòng)室前和流動(dòng)室后兩組。
流動(dòng)室前的光學(xué)系統(tǒng)由透鏡和小孔組成，透鏡和小孔(一般為2片透鏡、1個(gè)小孔)的主要作用是將激光光源發(fā)出的橫截面為圓形的激光光束聚焦成橫截面較小的橢圓形激光光束，使激光能量成正態(tài)分布，使通過(guò)激光檢測(cè)區(qū)的細(xì)胞受照強(qiáng)度一致，大限度的減少雜散光的干擾；流動(dòng)室后的光學(xué)系統(tǒng)主要由多組濾光片組成，濾光片的主要作用是將不同波長(zhǎng)的熒光信號(hào)送到不同的光電倍增管。
濾光片主要有三類(lèi)：長(zhǎng)波通(LPF)--只允許特定波長(zhǎng)以上的光線通過(guò)，短波通(SPF)--只允許特定波長(zhǎng)以下的光線通過(guò)，帶通(BPF)--只允許特定波長(zhǎng)的光線通過(guò)，不同組合的濾片可以將不同波長(zhǎng)的熒光信號(hào)送到不同的光電倍增管(PMT)，如接收綠色熒光(FITC)的PMT前面配置的濾光片是LPF550和BPF525，接收色橙紅色熒光(PE)的PMT前面配置的濾光片是LPF600和BPF575，接收紅色熒光(CY5)的PMT前面配置的濾光片是LPF650和BPF675。
流式細(xì)胞儀發(fā)明的初期，主要應(yīng)用在對(duì)細(xì)胞的分選上，隨著計(jì)算機(jī)技術(shù)，免疫學(xué)的發(fā)展以及單克隆抗體技術(shù)的發(fā)明，隨后才在生物學(xué)和醫(yī)學(xué)、藥學(xué)等領(lǐng)域的應(yīng)用越來(lái)越廣泛，如細(xì)胞動(dòng)力學(xué)分析、細(xì)胞調(diào)亡、細(xì)胞分型、腫瘤的診斷、藥物療效分析等許多領(lǐng)域。近年來(lái)，新型多功能流式細(xì)胞儀的開(kāi)發(fā)，多參數(shù)分析技術(shù)的建立，以及各種功能強(qiáng)大的分析軟件的開(kāi)發(fā)等，為流式細(xì)胞儀檢測(cè)結(jié)果性的提高和分析能力的擴(kuò)展提供了保障，可以相信，在未來(lái)生物學(xué)和醫(yī)學(xué)領(lǐng)域，流式細(xì)胞儀的應(yīng)用范圍會(huì)進(jìn)一步擴(kuò)大，應(yīng)用深度會(huì)進(jìn)一步加強(qiáng)。
